NCI-H596混合腺棘癌細(xì)胞

 無(wú)蛋白培養(yǎng)基與限定化學(xué)成分培養(yǎng)基

一、無(wú)蛋白培養(yǎng)基(protein free midium,PFM):即不含有動(dòng)物蛋白的培養(yǎng)基。無(wú)血清培養(yǎng)基仍含有較多的動(dòng)物蛋白，如胰島素，轉(zhuǎn)鐵蛋白、牛血清白蛋白等。從生物技術(shù)發(fā)展的趨勢(shì)來(lái)看，不含動(dòng)物蛋白的培養(yǎng)基又廣泛的應(yīng)用前景，許多利用基因工程技術(shù)重組的蛋白質(zhì)最終要應(yīng)用于人體，如果再生長(zhǎng)過(guò)程中使用了含有動(dòng)物蛋白質(zhì)的培養(yǎng)基，純化過(guò)程就比較復(fù)雜，最終要達(dá)到一定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)也有一定的難度。無(wú)蛋白培養(yǎng)基就是為了適應(yīng)這發(fā)展趨勢(shì)而出現(xiàn)的，許多無(wú)蛋白培養(yǎng)基添加了植物水解物以替代動(dòng)物激素、生長(zhǎng)因子的作用。市場(chǎng)上已有適合多種細(xì)胞生長(zhǎng)的無(wú)蛋白培養(yǎng)基。

二、限定化學(xué)成分培養(yǎng)基(chemical defined medium,CDM):是指培養(yǎng)基中的素有成分都是明確的，它同樣不含有動(dòng)物蛋白，同樣也不是添加了植物水解物，而是使用了一些已知結(jié)構(gòu)與功能的小分子化合物，如短肽、植物激素等。這種培養(yǎng)基更有利于分析細(xì)胞的分泌產(chǎn)物。目前已經(jīng)有適合于293細(xì)胞、CHO細(xì)胞、雜交瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的CDM問(wèn)世，

其他細(xì)胞培養(yǎng)用液

在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，除了培養(yǎng)基外，還經(jīng)常用到一些平衡鹽溶液、消化液、pH調(diào)整液等。

一、平衡鹽溶液(balanced salt solution,BSS):主要是由無(wú)機(jī)鹽、葡萄糖組成，它的作用是維持細(xì)胞滲透壓平衡，保持pH穩(wěn)定及提供簡(jiǎn)單的營(yíng)養(yǎng)。主要用于取材時(shí)組織塊的漂洗、細(xì)胞的漂洗、配制其他試劑等。最簡(jiǎn)單的BSS是Ringer。D-Hank's與Hank's的一個(gè)主要區(qū)別是前者不含有Ca2+、Mg2+，因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。Earle平衡液含有較高的NaHCO3(2.2g/L),適合于5%CO₂ 的培養(yǎng)條件，Hank's平衡液僅含有0.35g/L NaHCO₃，不能用于5%CO₂的環(huán)境，若放入CO₂培養(yǎng)相，溶液將迅速變酸，使用時(shí)應(yīng)注意。

配制溶液應(yīng)使用雙蒸水或去離子水。如果配方中含有Ca²⁺、Mg²⁺，應(yīng)當(dāng)首先溶解這些成分。配好的平衡鹽溶液可以過(guò)濾除菌或高溫滅菌。

二、消化液:取材進(jìn)行原代培養(yǎng)時(shí)常常需要將組織塊消化解離形成細(xì)胞懸液，傳代培養(yǎng)時(shí)也需要將貼壁細(xì)胞從瓶壁上消化下來(lái)，常用的消化液有胰酶(Trypsin)溶液和EDTA溶液，有時(shí)也用膠原酶(collagenase)溶液。

1、胰酶溶液:胰酶活性可用消化酪蛋白的能力表示，常見(jiàn)有1:125和1:250，即一份胰酶可消化125或250份酪蛋白。組織培養(yǎng)用胰酶溶液一般配制成0.1-0.25%濃度，配制時(shí)要用不含Ca²⁺ 、Mg²⁺及血清的平衡鹽溶液(如前面的D-Hank's)，因?yàn)檫@些物質(zhì)會(huì)對(duì)胰酶產(chǎn)生抑制作用。胰酶作用及溶解的pH是8-9，配制胰酶溶液應(yīng)將液體調(diào)至pH8左右，充分溶解，過(guò)濾除菌。過(guò)濾后可以再調(diào)只pH7.5，也可不調(diào)。

使用細(xì)胞清洗液配制胰酶消化液:含0.5%胰酶的細(xì)胞清洗液(100ml細(xì)胞清洗液加0.5g胰酶)，過(guò)濾除菌，分裝于4度保存。

2、EDTA溶液:EDTA溶液也常用來(lái)解離細(xì)胞，它的作用機(jī)制是破壞細(xì)胞間的連接。對(duì)于一些貼壁特別牢固的細(xì)胞，還可以用EDTA和胰酶的混合液進(jìn)行消化。EDTA溶液的使用濃度為0.02%，配制時(shí)應(yīng)加堿助溶，配制后可過(guò)濾除菌，也可高溫消毒滅菌。

3、膠原酶溶液:膠原酶在上皮類(lèi)細(xì)胞原代培養(yǎng)時(shí)經(jīng)常使用，膠原酶作用的對(duì)象是膠原組織，因此不容易對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生損傷。膠原酶的使用濃度為0.1-0.3mg/L或200000U/L,作用的pH為6.5。膠原酶不受Ca²⁺ 、Mg²⁺及血清的抑制，配制時(shí)可用PBS。

三、pH調(diào)整液:常用的有HEPES液和NaHCO₃溶液。

1、NaHCO₃溶液:NaHCO₃是培養(yǎng)基中必須添加的成分，一般情況下按說(shuō)明書(shū)的要求準(zhǔn)確添加，以保證培養(yǎng)基在5%CO₂的環(huán)境下pH達(dá)到設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)。如果是封閉式培養(yǎng)，即不與5%CO₂的環(huán)境發(fā)生交換達(dá)到平衡，所使用的培養(yǎng)基就不能按照說(shuō)明書(shū)所要求加入NaHCO₃。此時(shí)常用5.6%或7.4%的NaHCO₃溶液調(diào)節(jié)培養(yǎng)基，使之達(dá)到所要求的pH環(huán)境。

2、HEPES溶液:是一種弱酸，中文名字是羥乙基哌秦乙硫磺酸，對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性，主要作用是防止培養(yǎng)基pH迅速變動(dòng)。在開(kāi)放式培養(yǎng)條件下，觀察細(xì)胞時(shí)培養(yǎng)基脫離了5%CO₂的環(huán)境，CO₂ 氣體迅速逸出，pH迅速升高，若加了HEPES，此時(shí)可以維持pH7.0左右。一般在進(jìn)行克隆化培養(yǎng)時(shí)要添加HEPES。

四、抗生素:常用的是青鏈霉素，俗稱(chēng)“雙抗溶液”。青霉素主要是對(duì)革蘭陽(yáng)性菌有效，鏈霉素主要對(duì)革蘭陰性菌有效。加入這兩種抗生素可預(yù)防絕大多數(shù)細(xì)菌污染。通常使用青霉素終濃度0.007-0.008g/100ml,鏈霉素終濃度0.01g/100ml。一般配制成100倍濃縮液，可用PBS或培養(yǎng)基配制。

五、谷氨酰胺補(bǔ)充液:谷氨酰胺在細(xì)胞代謝過(guò)程中起重要作用，合成培養(yǎng)基中都要添加，由于谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定容易降解，4℃下放置7天即可分解約50%，所以都是在使用前添加。配制好的培養(yǎng)液(含谷氨酰胺)在4℃放置2周以上時(shí)，要重新加入原來(lái)量的谷氨酰胺，故需單獨(dú)配制谷氨酰胺，以便臨時(shí)加入培養(yǎng)液內(nèi)。谷氨酰胺使用終濃度為0.002mol/L。一般配制為100倍濃縮液，即濃度為200mmol/L(29.22g/L)，配制時(shí)應(yīng)加溫30℃，*溶解后過(guò)濾除菌，分裝至小瓶，儲(chǔ)存于-20℃。使用時(shí)，在每100ml培養(yǎng)液中加入0.5~2ml谷氨酰胺濃縮液，終濃度為1~4mmol/L。

六、二肽谷氨酰胺(L-丙氨酰-L-谷氨酰胺)

在細(xì)胞培養(yǎng)液中L-谷氨酰胺是大部分細(xì)胞培養(yǎng)基的基本成分;而L-谷氨酰胺是一種并不穩(wěn)定的氨基酸，在中性的水溶液中會(huì)自發(fā)降解;需要頻繁地補(bǔ)加L-谷氨酰胺。因而在培養(yǎng)操作過(guò)程中經(jīng)常:

(1)頻繁打開(kāi)蓋子，增加了破壞無(wú)菌狀態(tài)的可能性;

(2)過(guò)多的追加L-谷氨酰胺，增加了培養(yǎng)基中氨的毒性水平。

二肽谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)中穩(wěn)定而不降解,可高壓滅菌,釋放毒性氨最少!

二肽谷氨酰胺在細(xì)胞內(nèi)被氨肽酶(E.C.3.4.11.2)所水解，產(chǎn)生L-谷氨酰胺和L-丙氨酸;因此在大部分細(xì)胞系統(tǒng)中二肽谷氨酰胺就可以象L-谷氨酰胺同樣有效地被利用。二肽谷氨酰胺是替代物，它無(wú)需適應(yīng);既可用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，也適合于懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)。

NCI-H596混合腺棘癌細(xì)胞

697細(xì)胞，急性淋巴細(xì)胞B細(xì)胞白血病細(xì)胞

5637細(xì)胞，人膀胱癌細(xì)胞
1321N1細(xì)胞，星形細(xì)胞瘤細(xì)胞
143B細(xì)胞，人骨肉瘤細(xì)胞
22Rv1細(xì)胞，人前列腺細(xì)胞
23132/87細(xì)胞， 腺癌;惡性腺瘤細(xì)胞
253J細(xì)胞，移行細(xì)胞癌細(xì)胞
253J-BV細(xì)胞，移行細(xì)胞癌細(xì)胞
42-MG-BA細(xì)胞，星形細(xì)胞瘤分級(jí)IV細(xì)胞
59M細(xì)胞，移行細(xì)胞癌細(xì)胞
639-V細(xì)胞，移行細(xì)胞癌細(xì)胞
647-V細(xì)胞，
769-P細(xì)胞，透明細(xì)胞腎細(xì)胞癌細(xì)胞
786-O細(xì)胞，透明細(xì)胞腎細(xì)胞癌細(xì)胞
8305C細(xì)胞，未分化癌細(xì)胞
8505C細(xì)胞，未分化癌細(xì)胞
8-MG-BA細(xì)胞，星形細(xì)胞瘤分級(jí)IV細(xì)胞
A101D細(xì)胞，
A1207細(xì)胞，
A172細(xì)胞，星形細(xì)胞瘤分級(jí)IV細(xì)胞
A-204細(xì)胞，
A2058細(xì)胞，
A-253細(xì)胞， 粘液表皮樣癌;粘表皮癌細(xì)胞
A2780細(xì)胞，惡性腫瘤，腺癌細(xì)胞
A3/KAW細(xì)胞，彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞
A-375細(xì)胞，
A4/Fuk細(xì)胞，彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞
A-498細(xì)胞，腎細(xì)胞癌細(xì)胞
A549細(xì)胞，非小細(xì)胞癌細(xì)胞
A-673細(xì)胞，
A-704細(xì)胞，腎細(xì)胞癌細(xì)胞
ABC-1細(xì)胞，非小細(xì)胞癌細(xì)胞
ACC-MESO-1細(xì)胞，
ACHN細(xì)胞，腎細(xì)胞癌細(xì)胞
AGS細(xì)胞，腺癌;惡性腺瘤細(xì)胞
Alexander cells細(xì)胞，肝癌細(xì)胞
ALL-SIL細(xì)胞，急性淋巴細(xì)胞B細(xì)胞白血病細(xì)胞
AM-38細(xì)胞，星形細(xì)胞瘤分級(jí)IV細(xì)胞
AML-193細(xì)胞，急性髓性白血病細(xì)胞
AMO-1細(xì)胞，漿細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞
AN3 CA細(xì)胞，星形細(xì)胞瘤細(xì)胞
AsPC-1細(xì)胞，導(dǎo)管癌細(xì)胞
AU565細(xì)胞，
AZ-521細(xì)胞，
BC-3C細(xì)胞，移行細(xì)胞癌細(xì)胞
BCP-1細(xì)胞，B細(xì)胞淋巴瘤不明細(xì)胞
B-CPAP細(xì)胞，**狀癌細(xì)胞
BDCM細(xì)胞，急性淋巴細(xì)胞B細(xì)胞白血病細(xì)胞
Becker細(xì)胞，星形細(xì)胞瘤分級(jí)IV細(xì)胞
BEN細(xì)胞，
BFTC-905細(xì)胞，移行細(xì)胞癌細(xì)胞
BFTC-909細(xì)胞，
BHT-101細(xì)胞，未分化癌細(xì)胞
BHY細(xì)胞，鱗狀細(xì)胞癌，扁平上皮癌細(xì)胞
BICR 16細(xì)胞，鱗狀細(xì)胞癌，扁平上皮癌細(xì)胞
BICR 18細(xì)胞，鱗狀細(xì)胞癌，扁平上皮癌細(xì)胞
BICR 22細(xì)胞，鱗狀細(xì)胞癌，扁平上皮癌細(xì)胞
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BICR 56細(xì)胞，鱗狀細(xì)胞癌，扁平上皮癌細(xì)胞
BICR 6細(xì)胞，鱗狀細(xì)胞癌，扁平上皮癌細(xì)胞
BJ hTERT細(xì)胞，不滅的纖維母細(xì)胞
BL-41細(xì)胞，伯基特淋巴瘤細(xì)胞
BL-70細(xì)胞，伯基特淋巴瘤細(xì)胞
BT-20細(xì)胞，導(dǎo)管癌細(xì)胞
BT-474細(xì)胞，導(dǎo)管癌細(xì)胞
BT-483細(xì)胞，導(dǎo)管癌細(xì)胞
BT-549細(xì)胞，導(dǎo)管癌細(xì)胞
BV-173細(xì)胞，慢性髓樣白血病爆炸階段細(xì)胞
BxPC-3細(xì)胞，導(dǎo)管癌細(xì)胞
C2BBe1細(xì)胞，腺癌細(xì)胞
C32細(xì)胞，
C3A細(xì)胞，肝癌細(xì)胞
CA46細(xì)胞，伯基特淋巴瘤細(xì)胞
CADO-ES1細(xì)胞，
Caki-1細(xì)胞，透明細(xì)胞腎細(xì)胞癌細(xì)胞
Caki-2細(xì)胞，透明細(xì)胞腎細(xì)胞癌細(xì)胞
CAL 27細(xì)胞，鱗狀細(xì)胞癌，扁平上皮癌細(xì)胞
CAL-120細(xì)胞，
CAL-12T細(xì)胞，非小細(xì)胞癌細(xì)胞
CAL-148細(xì)胞，導(dǎo)管癌細(xì)胞
CAL-29細(xì)胞，移行細(xì)胞癌細(xì)胞
CAL-33細(xì)胞， 鱗狀細(xì)胞癌，扁平上皮癌細(xì)胞
CAL-51細(xì)胞，
CAL-54細(xì)胞，腎細(xì)胞癌細(xì)胞
CAL-62細(xì)胞，未分化癌細(xì)胞
CAL-78細(xì)胞，去分化細(xì)胞
CAL-85-1細(xì)胞，
Calu-1細(xì)胞，鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞
Calu-3細(xì)胞，腺癌細(xì)胞
Calu-6細(xì)胞，未分化癌細(xì)胞
CAMA-1細(xì)胞，
Caov-3細(xì)胞，惡性腫瘤，腺癌細(xì)胞
Caov-4細(xì)胞，惡性腫瘤，腺癌細(xì)胞
Capan-1細(xì)胞，人胰腺癌細(xì)胞
Capan-2細(xì)胞，人胰腺癌細(xì)胞
CAS-1細(xì)胞，星形細(xì)胞瘤分級(jí)IV細(xì)胞
CCF-STTG1細(xì)胞，星形細(xì)胞瘤細(xì)胞
CCK-81細(xì)胞，腺癌細(xì)胞
Cell.line.primary.name細(xì)胞，導(dǎo)管癌細(xì)胞
CFPAC-1細(xì)胞，濾泡性癌細(xì)胞
CGTH-W-1細(xì)胞，濾泡性癌細(xì)胞
CH-157MN細(xì)胞，