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L02人正常肝細胞
| 種屬來源: | 人 |
|---|---|
| 組織來源: | 肝臟 |
| 疾病特征: | 正常 |
| 細胞形態(tài): | 上皮細胞樣 |
| 生長特性: | 貼壁生長 |
| 培養(yǎng)基: | RPMI-1640，90%；FBS，10%。 |
| 生長條件: | 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%; 溫度：37 ℃, |
| 傳代方法: | 1：2至1：6，每周2次。 |
| 凍存條件: | 90% *培養(yǎng)基+10% DMSO，液氮儲存 |
| 支原體檢測: | 陰性 |
L-02細胞建系鑒定于1980年。該細胞是一株正常肝細胞系，具有典型的肝細胞形態(tài)學特征，可用于多種實驗研究。
1) 收到細胞后，請檢查是否漏液 ，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。
2) 請先在顯微鏡下確認細胞生長 狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3) 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加 6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
4) 如果細胞密度達80%-90%請及 時進行細胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
5) 接到細胞次日，請檢查細胞是 否污染，若發(fā)現污染或疑似污染，請及時與我們取得聯(lián)系。
L02人正常肝細胞
"購買細胞注意事項：
1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。
2. 仔細閱讀細胞說明書，細胞了解細胞相關信息如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等。
3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落，將細胞置于培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)過夜，隔天再取出觀察。此時多數細胞均會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常，請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結果顯示細胞無活力，請拍下照片及時和我們聯(lián)系，信息確認后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。
4. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和技術部溝通交流
細胞培養(yǎng)三不要：
養(yǎng)科研細胞是生物醫(yī)學研究的基本功。有三個小經驗可以和大家分享一下：
1. 不要燒瓶口。大多數人都喜歡在酒精燈的火焰上關瓶子，覺得這樣可以避免污染。不知道大家是不是有培養(yǎng)基怎么越用越發(fā)紫的困惑？知道為什么嗎？燒瓶口燒的。培養(yǎng)基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系。瓶口在火焰上的時候，熾熱的空氣進入瓶內。塞緊塞子放入冰箱后，空氣變冷，壓力驟降，培養(yǎng)基中的碳酸就會轉化成二氧化碳，釋放出來。培養(yǎng)基中的碳酸少了，當然會變堿。如果不燒瓶口的話，你會發(fā)現培養(yǎng)液變堿的速度會大大減慢。（當然多多少少還是會有一點越用越堿，因為室溫還是比冰箱內的溫度高）
其實燒瓶口防止污染純粹是心理安慰。不妨試一下把手指在火上晃幾下，你會發(fā)現根本就不會燒疼。如果有細菌的話，這么晃兩下也燒不死多少。要想燒死全部細菌，除非把瓶口和塞子燒紅。我在國內從來就不燒瓶口。來美國以后發(fā)現這里更*，超凈臺內根本就不點酒精燈。
2. 不要頻繁看細胞。對于初學者而言，養(yǎng)細胞就像養(yǎng)孩子一樣，有空就要去看看。細胞越是養(yǎng)不好，就越是經常去看。實際上看細胞對細胞的生長沒有任何好處，細胞特別是對原代細胞或是免疫磁珠分選后，密度特別低的細胞。培養(yǎng)基中的生長因子是非常有限的。細胞好不容易自分泌一點兒促生長的因子在其周圍，形成有利于生長的局部環(huán)境。你跑去看細胞，培養(yǎng)瓶這么一晃，把因子都給晃散了。經?？梢钥吹叫率忠惶斓酵矶荚诳醇毎?，細胞老是長不好。老手細胞一扔好幾天不管，細胞瘋長。
3. 不要怕消化。在傳代的時候，初學者往往生怕細胞消化過度，早早地終止消化。細胞沒下來就使勁吹燈，吹得滿瓶子都是氣泡。在我看來，用力吹打對細胞的損傷比消化更大。我?guī)熜衷谧鲅芷交≡臅r候，37度消化過夜，細胞也沒事。我一般是等細胞*變圓后才中止消化。細胞輕輕一晃就能下來。還有，動作要輕柔，盡量不要產生氣泡。
應力相當大，對細胞的傷害也是很大的。" 詳見細胞說明書
傳代方法： 建議1:2-1:3 兩天換液一次
凍存條件： 詳見細胞說明書
主要文獻： 請具體查閱相關發(fā)表文章
細胞培養(yǎng)三不要：
養(yǎng)科研細胞是生物醫(yī)學研究的基本功。有三個小經驗可以和大家分享一下：
1. 不要燒瓶口。大多數人都喜歡在酒精燈的火焰上關瓶子，覺得這樣可以避免污染。不知道大家是不是有培養(yǎng)基怎么越用越發(fā)紫的困惑？知道為什么嗎？燒瓶口燒的。培養(yǎng)基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系。瓶口在火焰上的時候，熾熱的空氣進入瓶內。塞緊塞子放入冰箱后，空氣變冷，壓力驟降，培養(yǎng)基中的碳酸就會轉化成二氧化碳，釋放出來。培養(yǎng)基中的碳酸少了，當然會變堿。如果不燒瓶口的話，你會發(fā)現培養(yǎng)液變堿的速度會大大減慢。（當然多多少少還是會有一點越用越堿，因為室溫還是比冰箱內的溫度高）
其實燒瓶口防止污染純粹是心理安慰。不妨試一下把手指在火上晃幾下，你會發(fā)現根本就不會燒疼。如果有細菌的話，這么晃兩下也燒不死多少。要想燒死全部細菌，除非把瓶口和塞子燒紅。我在國內從來就不燒瓶口。來美國以后發(fā)現這里更*，超凈臺內根本就不點酒精燈。
2. 不要頻繁看細胞。對于初學者而言，養(yǎng)細胞就像養(yǎng)孩子一樣，有空就要去看看。細胞越是養(yǎng)不好，就越是經常去看。實際上看細胞對細胞的生長沒有任何好處，細胞系特別是對原代細胞或是免疫磁珠分選后，密度特別低的細胞。培養(yǎng)基中的生長因子是非常有限的。細胞好不容易自分泌一點兒促生長的因子在其周圍，形成有利于生長的局部環(huán)境。你跑去看細胞，培養(yǎng)瓶這么一晃，把因子都給晃散了。經?？梢钥吹叫率忠惶斓酵矶荚诳醇毎毎鲜情L不好。老手細胞一扔好幾天不管，細胞瘋長。
3. 不要怕消化。在傳代的時候，初學者往往生怕細胞消化過度，早早地終止消化。細胞沒下來就使勁吹燈，吹得滿瓶子都是氣泡。在我看來，用力吹打對細胞的損傷比消化更大。我?guī)熜衷谧鲅芷交≡臅r候，37度消化過夜，細胞也沒事。我一般是等細胞*變圓后才中止消化。細胞輕輕一晃就能下來。還有，動作要輕柔，盡量不要產生氣泡。應力相當大，對細胞的傷害也是很大的。
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